當前所在頁面：一、紫外燈殺菌效果檢查
紫外燈在使用過程中輻射強度會逐漸降低，會影響其殺菌效果，故應該定期檢測。紫外燈的殺菌有效波長是253.7 nm,其強度可以用中心波長254 nm的紫外線強度計測定。在沒有紫外線強度計的情況下可以采用生物學測試代替。
生物學測試簡要步驟如下：選用枯草芽孢桿菌ATCC 9372,制成106CFU/mL~108 CFU/mL濃度的菌懸液；選用經脫脂處理的0.5 cm x 1.0cm大小的布片或鋁片，高壓滅菌后用作載體；每個載體上滴一滴制備好的菌懸液，干燥后備用；將8個染菌載體放于無菌器皿中，置于紫外燈下1 m~1. 5 m處，開啟紫外燈照射，于0.5h、 1 h、 1.5h和2h各取出2個染菌載體，分別投入盛有5ml.緩沖蛋白胨水的洗脫液；系列稀釋后進行平板計數；同法取8個染菌載體用做陽性對照，操作除不經紫外線照射外與試驗組相同。
殺滅率 =(陽性對照回收菌數-試驗組回收菌數)×100% / 陽性對照回收菌數殺滅率大于99.9%時，認為紫外燈殺菌效果合格。
二、無菌室空氣質量檢查
無菌室空氣質量的檢查應按照采樣計劃，根據情況對處于空態、靜態或正常運行的風險區，使用適當的儀器采集空氣中微生物，測定并監測風險區空氣的微生物污染。無菌室空氣質量的檢查可以參考GB/T 16293 《醫藥工業潔凈室(區)浮游菌的測試方法》和GB/T 25915.7《潔凈室及相關受控環境 第7部分：隔離裝置(潔凈風罩、手套箱、隔離器、微環境)》。
空氣懸浮微生物的采樣和計數方法多種多樣，根據所需采樣目的決定具體的采樣方法和采樣器。因采樣器的采集效率不同，應慎重選擇合適的方法和設備。
采樣器分為兩類：被動式采樣器，如落菌盤；主動式采樣器，如濾過采樣器、撞擊采樣器、沖擊采樣器等。
1、沉降法
落菌盤等被動式空氣微生物采樣器不能測量空氣中微生物的總數，而是測量空氣中微生物在表面的沉降率。只要確定單位時間落菌盤上微生物的數量，再根據落菌盤的暴露面積與暴露時間之間的關系，即可大致計算出空氣中微生物的數量。
面積小于30 m2的室內設一對角線取3點，在其中心及兩端距墻1 m處各取一點；面積大于30 m2的室內房間四面距墻1 m和中央各放置一個平皿，高度為實驗臺的高度。培養基平皿開蓋暴露10 min,然后蓋蓋倒放，培養48 h,計數每個平1上的菌落數。
日常監控時，可以設定可接受的菌落數限值。一般無菌室的所有取樣平皿上的細菌總數應小于15個�？諝赓|量良好的無菌室，通常每個平皿上生長的細菌不超過2個。
也可以按式(10-2)估算空氣中的細菌濃度：
C=（50000 x N ）/ （A × t）.......( 10-2)
式中：
C一空氣中的細菌濃度，單位為菌落集成單位每立方米(CFU/m3)；
A--平板面積，單位為平方厘米(cm2)；
t一平板暴露時間，單位為分鐘(min)；
N-平均菌落數，單位為每1L (CFU/L)。
2、空氣濾過法
空氣采樣除了自然沉降法外，還可以使用專門的主動式采樣器。主動式采樣器可以評估 風險區空氣微生物特征。主動式采樣器主要包括撞擊采樣器、濾過采樣器和沖擊采樣器等。
撞擊采樣器可以分為狹縫式采樣器、離心式采樣器和針孔式采樣器。狹縫式采樣器由附加的真空抽氣泵抽氣，通過采樣器的縫隙式平板，將采集的空氣噴射并撞擊到緩慢旋轉的平板培養基表面上，附著的活微生物粒子經培養后形成菌落，予以計數。離心式采樣器由于內部風機的高速旋轉，氣流從采樣器前部吸入從后部流出，在離心力的作用下，空氣中的活微生物粒子有足夠的時間撞擊到專用的固形培養條上，經培養后形成菌落，予以計數。
過濾式空氣采樣器是最常用的、最簡單的空氣采樣器。過濾式采樣器由采樣頭、濾器、流量計和抽氣泵組成。
開動電機后，抽氣泵工作，帶動空氣吸入采樣頭，空氣通過濾器的時候，大于濾膜孔徑的顆粒就被阻留，當達到預先設定吸氣體積后抽氣泵停止工作，將濾膜取出轉貼到培養基上，培養后計算空氣中的微生物濃度。過濾式采樣器捕獲效率高，但是濾膜材料可能影響微生物的存活率，還有采樣阻力大、流量易變的缺陷。
三、無菌室物體表面微生物污染檢查
表面微生物污染的檢查需要使用接觸器或拭子，獲得某表面某時間點的微生物數量。
接觸器以容器內已知面積的固態營養介質與表面接觸，接觸面積應大于20 cm2,均勻用力將整個營養介質壓住表面幾秒鐘，不得移動。然后將裝置放回容器內，再清潔被采樣表面，清除殘留營養物。接觸器培養后顯現的菌落可以給出原表面微生物存活狀況的鏡像“圖”。
使用拭子更為簡單和靈活，用拭子擦拭某個表面，它抹去的微生物數量就可計算出了。對接觸裝置觸及不到的、不平或有凹陷的非吸收性大表面，用拭子采樣特別方便。棉拭子的操作方法如下：
準備材料：自制無菌棉拭子或購買商品化的無菌棉拭子(見圖10-12)、內徑10cm x 10 cm無菌規格板、無菌生理鹽水、培養基平皿。
如果取樣物體是平面的，將無菌規格板放在物體表面，用浸濕的無菌棉拭子在無菌規格板空心處橫豎涂抹均勻，涂抹時隨之轉動棉拭子，剪去棉拭子與手接觸部分，將棉拭子放入裝有一定體積的無菌生理鹽水中待檢。
采樣管敲打80次以上使棉拭子上的細菌充分擴散，作適當稀釋，進行平板計數，37 ℃培養48 h計數，見式(10-3)。
細菌總數(CFU/m2)=（平皿上菌落平均數 × 稀釋倍數 ）/采樣面積 (cm2).......( 10-2)
【例10.1】某操作臺面采樣面積100 cm2 ,棉拭子放入10 mL生理鹽水，從中取1 mL檢測，平皿上平均菌落數為5個。則細菌總數為：
5x10/100=0. 5(CFU/cm2)
如果取樣物品表面不規則或者物品采樣面積不足100 cm2 ,取整件物品進行棉拭子涂抹取樣，其余步驟同上，見式(10-4)。細菌總數(CFU/件) =平皿上菌洛平均數×稀釋倍數 / 件.......(10-4)
四、人員接觸面無菌檢查
人員與檢測對象的接觸面主要是手。
被檢人員洗手消毒后，五指并攏。將浸泡過的棉拭子沿雙手指屈面從指根到指端往返涂擦2次(每只手涂擦面積約30cm2),涂擦的同時轉動棉拭子。剪去操作者手接觸部位，將棉拭子放入裝有一定體積的無菌生理鹽水中待檢。
按“無菌室物體表面細菌污染檢查”的方法進行樣品處理、接種、培養、計數和報告結果。
