當前所在頁面：劑的選擇要求，先簡單的概括一下：
1、能夠溶解待測物質；
2、不影響待測物質檢測；
3、能夠在一定時間范圍內保持待測物質穩定。
一、什么是溶劑效應
樣品溶液的溶劑強度強于流動相溶劑強度時可能會造成的峰展寬、峰分叉現象。
即色譜圖上較早洗脫的峰前沿或者開叉，與此同時較晚洗脫的峰則較為正常的現象。
這些現象可能是由以下原因引起的——樣品溶液的溶劑很可能強于流動相。
可能發生溶劑效應的情況：出峰時間早；保留弱；進樣量大。
上圖中，色譜圖上較早洗脫的峰扭曲變形或者開叉，與此同時較晚洗脫的峰則較為尖銳與對稱，這些現象顯示一個比較特殊的起因――樣品溶液的溶劑很可能強于流動相。此種強溶劑效應的例子在左圖中可見。此處的樣 品溶液的溶劑是100%乙腈(100%的強溶劑)，而流動相的組成則較弱，18%的乙腈與72%的水。第一個峰是開叉的，并且與第二個峰相比，明顯地變寬 了。當樣品溶液的溶劑變成流動相時，所有的峰形都改善了，且變得尖銳。見右圖。
為什么呢？這是因為當樣品進樣時，有可能出現峰展寬，最佳的樣品溶液組成和體積將會保持在10%甚至更低，在這個例子里，當樣品溶劑與流動相溶劑強度不同時，換句話來說，也就是樣品未用流動相溶解，因此，有些樣品分子溶解在強溶劑中，并隨強溶劑流過柱子，而有些則溶解在流動相中，從而導致峰分叉。
當樣品與流動相強度相差較小，進樣影響也會小，第一個峰可能會寬于第二個峰，而當這種展寬導致必要的分離度降低時，這樣情況應引起注意，在左圖中，使用一根短柱，和5μL進樣，這與最佳進樣體積4μL相近，用了極性更強的溶劑導致分離度明顯的降低，從2.1降到1.5(如右圖，分離度為2或更大是評估一個完善方法的一個必要參數，也是每個方法的驗證參數，1.5只是一個基本的分離度，任何一個方法或一根柱子都必需滿足這個條件，當進樣為一倍時，也就是10μL時，分離度更一步降低，此方法就不行了。
液相色譜系統的很多問題都能在譜圖上反映出來，其中一些問題可以通過改變設備參數得到解決，而其它的問題必須通過修改操作程序來解決。
二、樣品溶劑選擇不當的解決方法
三、HPLC溶劑的要求
1、高純度，溶劑與固定相不互溶，并能保持色譜柱的穩定性。由于高效液相靈敏度高，對流動相溶劑的純度要求也高。不純的溶劑會引起基線不穩，或產生“偽峰”。
2、溶劑對于待測樣品，必須具有合適的極性和良好的選擇性，即足夠的溶解能力。溶劑的極性要與待測樣品相匹配，如果溶解度欠佳，樣品會在柱頭沉淀，不但影響純化分離，且會使柱子惡化。
3、溶劑要與檢測器匹配
對于UV-Vis，所用流動相在檢測波長下應沒有吸收或UV 吸收很小。
4、化學穩定性好
不能選與樣品發生反應或聚合的溶劑。
5、低粘度，沸點適中
減小溶質的傳質阻力，降低柱壓，利于提高柱效。
常用的低粘度溶劑有丙酮、乙醇、乙腈等；粘度過低的溶劑也不宜采用，如戊烷、乙醚等，易在色譜柱或檢測器內形成氣泡，影響分離。
四、HPLC溶劑關鍵性能
1、UV吸收性
HPLC級試劑是用特殊方法生產的含有最少的顆粒和最低的紫外吸收物質，除去具有吸收UV的雜質，在規定的波長上吸光度限制在規定值以內。
2、梯度洗脫性能
在一個分析周期內程序控制流動相的組成，如溶劑的極性、離子強度和pH值等，用于分析組分數目多、性質差異較大的復雜樣品。
采用梯度洗脫可以縮短分析時間，提高分離度，改善峰形，提高檢測靈敏度。
①溶劑的互溶性，不相混溶的溶劑不能作為梯度洗脫的流動相。
當有機溶劑和緩沖液混合時，可能析出鹽的晶體，尤其使用磷酸鹽時需特別小心。
②純度要求更高，以保證良好的重現性。進行樣品分析前必須進行空白梯度洗脫，以辨認溶劑雜質峰，因為弱溶劑中的雜質富集在色譜柱頭后會被強溶劑洗脫下來。用于梯度洗脫的溶劑需徹底脫氣，以防止混合時產生氣泡。
③ 防止壓力過大。
混合溶劑的粘度常隨組成而變化，因而在梯度洗脫時常出現壓力的變化。
例如甲醇和水粘度都較小，當二者以相近比例混合時粘度增大很多，此時的柱壓大約是甲醇或水為流動相時的兩倍。
五、反相液相色譜
柱效高、分離能力強、保留機理清楚，是液相色譜分離模式中使用最為廣泛的一種。適用于非極性-中等極性組分。
固定相：極性小的烷基鍵合相 C8柱，C18柱；
流動相：流動相極性 > 固定相極性 極性大的甲醇-水或乙腈-水
HPLC里面的溶劑效應是如何產生的，該如何避免？如何判斷分叉的峰是否由溶劑效應造成，第一就是通過HPLC儀器比對一下兩個劈叉峰的紫外吸收波譜，看看他們是否能完全一樣的μV特征吸收，第二將進樣體積調節到0.1μl看看，峰是否好轉，如果滿足上面兩個條件幾乎就可以肯定是100%的溶劑效應。產生原因：
1、樣品溶液的溶劑很可能強于流動相。例如樣品溶液的溶劑是100%乙腈(100%的強溶劑)，而流動相的組成則較弱，18%的乙腈與72%的水；
2、就是進樣量比較大；
3、樣品的pH值與HPLC流動相pH懸殊，比如酸性流動相體系，樣品pH偏堿性(pH=10),這種情況下也很有可能發生 其實上面三個原因歸結起來就是一個原因，那就是樣品的溶劑與流動相存在一些不一樣，當樣品進入流動相的時候，由于這種巨大的差異，一部分樣品溶解進入了流動相，一部分還留在進樣的溶劑里面，所以在HPLC上出現了保留的差異，所以要解決這個問題的最佳方案就是，使用流動相的起始梯度溶解樣品，如果由于溶解度的問題，不得不改用其余的溶劑，那就只能降低進樣體積來解決，比如 5μL，1μL。
GC-MS 測定PAHs，HP-5MS (Agilent) 柱，固相萃取后使用甲醇洗脫。用甲醇做溶劑，是否會影響柱效和柱壽命。是否是最佳選擇？甲醇的沸點比較高，極性比較大，如果換成正己烷類的弱極性，低沸點，配合一定的色譜條件可以實現溶劑聚焦作用，顯著提高保留時間較短的化合物的靈敏度和檢出線。甲醇相對于正己烷等極性小的溶劑，造成的柱流失大，國外用乙腈做GC-MS溶劑的文獻很多，很多用來減少前面溶劑轉換步驟，結合大體積進樣等，溶劑先揮發分流走掉，從而進入柱子乙腈溶劑的較少，可認為對柱子影響不大，同時甲醇乙腈對比，乙腈的柱流失要少。
現有個樣品，其結構中只有孤立的C=O。由于樣品溶于乙醇，所以第一次做紫外掃描時就以乙醇作為溶劑。結果在202nm處測得了最大吸收。檢測該化合物的HPLC條件是以乙腈－水作為流動相的。我用流動相作為溶劑再對該化合物進行紫外掃描。結果在197nm處測得了最大吸收。而在200～400nm范圍內僅在285nm處測得一很小的吸收峰。在做紫外掃描時，樣品溶劑不同，測得的樣品的最大吸收波長也會不同。
如果用HPLC-UV檢測該化合物，波長選為202nm(以乙醇作為溶劑測得的)，是否合適呢？在做HPLC檢測時，樣品的溶劑如果不是流動相之一，會不會影響檢測結果呢？C=O在270～300nm有較弱的紫外吸收(ε=10～100)，285nm的峰應為C=O的吸收。乙腈-水的極性強于乙醇，由于N-π躍遷的存在，將發生藍移(最大吸收202變為197)，在紫外區的邊緣測定有關物質則干擾甚大，不合適；測定含量勉強可以，如果僅測定含量可以根據吸收情況適當增加到210nm左右。如果溶劑跟流動相一樣，那紫外吸收也應該一致，否則樣品就非完全同一物質。紫外測定選擇最大吸收波長進行含量測定，可以提高檢測靈敏度，減少其他干擾，但這是相對的。
