志賀氏菌是目前致腸道感染的主要病原菌之一,主要流行于發展中國家,又稱痢疾桿菌,為革蘭氏陰性桿菌,需氧或兼性厭氧。
人類對痢疾桿菌有很高的易感性,幼兒可引起急性中毒,死亡率甚高。臨床上通常表現腹部痙攣痛、腹瀉和發熱。
志賀氏菌在不衛生和人口密集的條件下可迅速傳播,如餐廳、食堂。
全年均有發生,但夏、秋兩季多見。
中毒食品以冷盤和涼拌菜為主,熟食品在較高溫度下存放較長時間是引發志賀氏菌食物中毒的主要原因。
不要驚慌,嘔吐、腹瀉輕的可口服糖鹽水,應用抗生素。發熱達38℃以上或出現精神差者應及時到醫院治療。
首先不要食用存放時間長的熟食品,注意食品的徹底加熱和食用前再加熱。
同時要養成良好的衛生習慣,飯前便后必須徹底用香皂、洗手液洗手。不吃不干凈的食物及腐敗變質的食物,不喝生水。
因為健康人咽部葡萄球菌帶菌率可達20%至40%,所以制作生冷、涼拌菜時必須注意個人衛生及操作衛生。
目前,針對志賀氏菌的檢測方法標準——《食品安全國家標準食品微生物學檢驗志賀氏菌檢驗》(GB4789.5-2012)。今天,我們就共同來學習一下食品中志賀氏菌的檢驗吧。
適用于食品中志賀氏菌的檢驗。
分液器、拍擊式均質器、定量接種環、厭氧培養系統、生化鑒定系統。
志賀氏菌增菌肉湯、麥康凱(MAC)瓊脂、木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽(XLD)瓊脂、三糖鐵(TSI)瓊脂、半固體瓊脂、營養瓊脂 。
志賀氏菌檢驗流程
以無菌操作取檢樣25g(mL),加入裝有滅菌225mL志賀氏菌增菌肉湯的均質杯,用旋轉刀片式均質器以8000 r/min~10000 r/min均質;或加入裝有225mL志賀氏菌增菌肉湯的均質袋中,用拍擊式均質 器連續均質1min~2min,液體樣品振蕩混勻即可。于 41.5℃±℃,厭氧培養16h~20h。
取增菌后的志賀氏增菌液分別劃線接種于XLD瓊脂平板和MAC瓊脂平板或志賀氏菌顯色培養基平板上,于36℃±1℃培養20 h~24 h,觀察各個平板上生長的菌落形態。宋內氏志賀氏菌的單個菌落直徑大于其他志賀氏菌。若出現的菌落不典型或菌落較小不易觀察,則繼續培養至48 h 再進行觀察。志賀氏菌在不同選擇性瓊脂平板上的菌落特征見表1。
注:若在指定培養時間內,出現的菌落不典型或菌落較小不易觀察,可繼續培養至48h再進行觀察。
1)分別在MAC瓊脂平板和XLD瓊脂平板上選取2個以上典型或可疑菌落;
2)先用接種環挑取同一菌落,分別接種到TSI瓊脂斜面、半固體瓊脂和營養瓊脂斜面,再用接種針在TSI瓊脂斜面和半固體瓊脂斜面上進行穿刺;
3)標記清楚后置于36±1℃培養箱內,培養20~24h,觀察結果。
觀察TSI瓊脂中斜面產堿、底層產酸、不產氣、不產硫化氫,且半固體瓊脂中無動力的菌株,挑取對應的營養瓊脂斜面上生長的菌苔,進行生化試驗和血清學分型。
用營養瓊脂斜面上生長的菌苔,進行生化試驗,包括β-半乳糖苷酶、尿素、賴氨酸脫羧酶、鳥氨酸脫羧酶以及水楊苷和七葉苷的分解試驗。由于福氏志賀氏菌6型的生化特性和痢疾志賀氏菌或鮑氏志賀氏菌相似,必要時還需加做靛基質、甘露醇、棉子糖、甘油試驗,也可做革蘭氏染色檢查和氧化酶試驗,應為氧化酶陰性的革蘭氏陰性桿菌。生化特性見表2。
由于某些不活潑的大腸埃希氏菌(anaerogenic E.coli)、A-D(Alkalescens-D isparbiotypes 堿性-異型) 菌的部分生化特征與志賀氏菌相似,并能與某種志賀氏菌分型血清發生凝集;因此前面生化實驗符合志賀 氏菌屬生化特性的培養物還需另加葡萄糖胺、西蒙氏檸檬酸鹽、粘液酸鹽試驗(36 ℃培養 24 h~48 h)。志賀氏菌屬和不活潑大腸埃希氏菌、A-D 菌的生化特性區別見表 3。
由于傳統生化試驗過程需要使用大量試劑,且還需保證有足夠量的菌苔,因此有時可能需再次對可疑菌落進行擴繁。針對這些問題,目前常采用生化試劑盒或生化鑒定系統來完成這一步驟,以減少操作人員的工作量、降低工作難度,縮短檢測周期。
凡疑為志賀氏菌,可挑取營養瓊脂斜面上的培養物,做玻片凝集試驗。
1)抗原準備:志賀氏菌屬抗原結構由菌體抗原(O)及表面抗原(K)組成。一般采用1.2%~1.5%瓊脂培養物作為玻片凝集試驗用的抗原。
2)血清凝集反應:在玻片上選取2塊約1cmx2cm的區域,用接種環挑取一環待測菌分別放入選定區域內,往其中一塊下部加1滴抗血清,另一區域下部加1滴生理鹽水(對照),分別將菌落研成乳狀液,將玻片傾斜搖動,使菌與抗體/生理鹽水混合,1min后并對著黑色背景觀察結果。
抗血清中出現凝結成塊的顆粒,且生理鹽水中沒有發生自凝現象,那么凝集反應為陽性。
綜合以上生化試驗和血清學鑒定的結果,報告25g(mL)樣品中檢出或未檢出志賀氏菌。