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大腸菌群在檢測過程中的注意事項分享!
發布時間:2020-01-20編輯:

一 、方法的選擇


大腸菌群檢測的關鍵在于方法的選用,食品中大腸菌群檢測有兩種表示方法。


1、是以100mL(g)檢樣內大腸菌群最大可能數(MPN)表示,檢測方法需使用GB/T 4789.3-2003《食品衛生微生物學檢驗大腸菌群測定》;


2、以每g(mL)樣品中大腸菌群的MPN值表示,檢測方法需使用GB 4789.3-2016《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 大腸菌群計數》。


3、現行食品標準中規定的大腸菌群指標以“CFU/克或CFU/毫升”為單位的,適用GB 4789.3-2016,故檢測樣品前需根據產品標準認真選擇方法。


例如,GB/T2717-2003醬油衛生標準中對大腸菌群的要求需使用方法一GB/T 4789.3-2003。又如GB/T 2718-2014醬油衛生標準中對大腸菌群的要求需使用方法二GB4789.3-2016。


二、大腸檢測過程錦囊知識分享


1.MPN法:大腸菌群的國標檢驗法采用三步法,即乳糖發酵、分離培養和證實實驗。


第一步乳糖發酵試驗室樣品的發酵結果,不是純菌的發酵試驗,所以初發酵陽性管經過后兩步,有可能成為陰性。大量檢驗數據證明,食品中大腸菌群檢驗程序的符合率、初發酵與證實試驗相差很大,不同食品三步法的符合情況也不一致。


2.平板法:第一做平板法的時候需要覆蓋第二層培養基,它的作用是:有助于典型菌落形成也為了防止蔓延性細菌生長。第二,挑菌,其實這一步主要怕挑菌的時候挑不到菌,其實你可以把帶菌的部分培養基完全挑起來(不要怕培養基包含著它出不來)放到BGLB內,然后用手腕力搖一下試管就可以把培養基打碎。


一般來說,如果平板上有較多典型大腸菌群菌落,革蘭氏染色為陰性桿菌,即可做出判斷。如果平板上菌落數較少或不夠典型,則應多挑菌落做證實試驗,以免出現假陰性。只做一步初發酵,對某些食品來說誤差較大。這樣做,會有相當部分的合格樣品被作為不合格樣品處理,應予以注意。


3.初發酵產氣量:在糖發酵試驗中經?梢钥吹剑诎l酵套管內存在極小的氣泡(有時比小米粒還。,類似這種情況能否算是產期陽性,這是很多人經常遇到的問題。大腸菌群的產氣量,多者可以使發酵套管充滿氣體,少者產生比小米粒還小的氣泡。一般來說,產氣量與大腸菌群檢出率呈正相關,但隨樣品種類而有不同,有米粒大小氣泡的也有陽性檢出。另外,對未產氣的乳糖發酵管是否均應做陰性處理,根據大量時間工作經驗來看,對這種情況應慎重考慮,有時會遇到在初發酵時產酸無氣,但復發酵卻證實為大腸桿菌陽性。有時套管內雖無氣體,但在液面及管壁可以看到緩緩上升的小氣泡。所以對未產氣的發酵管有疑問時,可以用手輕輕敲動或搖晃試管,若有氣泡沿管壁上浮,即考慮為有氣體產生,應做進一步試驗觀察。這種情況的陽性檢出率可達半數以上。


4.復發酵是為什么用BGLB呢?


從它的成分蛋白胨、乳糖、牛膽粉、煌綠來看,蛋白胨提供氮源,乳糖提供碳源并作為指示劑,牛膽粉(oxgall或oxbile)溶液抑制革蘭陽性菌生長煌綠水抑制革蘭陽性菌和部分陰性菌生長。


5.EMB平板(挑選菌落):在檢驗方法中我們選用伊紅美藍平板為分離培養基,在該平板上,大腸菌群菌落大多呈紫黑色有金屬光澤或無金屬光澤。菌落形態的其他方面(如菌落的大小、光滑與粗糙、邊緣完整情況、隆起情況、濕潤與干燥)雖也應注意,但不如色澤方面更為重要。

挑取菌落數與大腸菌群的檢出率也有密切關系。在實際工作由于工作量較大,通常只挑取一個菌落,但影響大腸菌群檢出率的因素很多,如食品種類、菌落色澤和形態、細菌種類等,只挑取一個菌落,由于幾率問題,很難避免假陰性的出現,尤其當菌落不典型時。所以,挑取菌落時一定要挑取典型菌落,若無典型菌落則應多挑取幾個菌落,以免出現假陰性。


6.MPN檢索表使用:GB/T 4789.3-2003檢索表中陽性管數是以1mL(g)×3、0.1mL(g)×3和0.01mL(g)×3的梯度進行表示,GB 4789.3-2016陽性管數是以0.10、0.01和0.001的梯度表示,均按照稀釋倍數推算結果,結果相同。推算方法以GB 4789.3-2016為例,改用1g(mL)、0.1g(mL)和0.01g(mL)時,表內數字應相應降低10倍;如改用0.01g(mL)、0.001g(mL)和0.0001g(mL)時,則表內數字應相應增高10倍,其余類推即可。

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